《中國藥典》（現(xiàn)行版本為 2025 年版）中未對集菌儀的具體操作步驟進(jìn)行詳細(xì)圖文描述，但在 通則 1101 無菌檢查法 和 通則 1121 微生物限度檢查法 中，明確規(guī)定了集菌儀在 薄膜過濾法 中的應(yīng)用原則和技術(shù)要求。以下是基于藥典通則內(nèi)容提煉的操作規(guī)范及關(guān)鍵要點(diǎn)： 

一、適用范圍 

集菌儀主要用于藥品、生物制品等的 無菌檢查（確認(rèn)樣品是否含活菌）和 微生物限度檢查（測定樣品中微生物數(shù)量及控制菌），通過 薄膜過濾法 實(shí)現(xiàn)以下操作： 樣品過濾：截留微生物于濾膜表面，排除樣品抑菌成分或富集低濃度微生物。 沖洗與中和：用沖洗液或中和劑消除樣品干擾，確保后續(xù)培養(yǎng)準(zhǔn)確性。 接種培養(yǎng)：將濾膜轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)基中，觀察是否有菌生長。 

二、核心操作流程（基于藥典通則） 

1.設(shè)備與耗材準(zhǔn)備 集菌儀要求： 具備 蠕動泵 驅(qū)動管路，可調(diào)節(jié)流速（通常 0.1～100mL/min），并能保持恒定壓力。 配套 無菌集菌培養(yǎng)器（含濾膜，孔徑一般為 0.45μm，用于微生物限度檢查；0.22μm 用于無菌檢查）。 滅菌要求： 集菌培養(yǎng)器、濾膜、管路等耗材需經(jīng) 濕熱滅菌（121℃，30 分鐘）或 無菌采購（一次性無菌產(chǎn)品）。 操作需在 無菌環(huán)境 下進(jìn)行（如潔凈工作臺或無菌隔離系統(tǒng)）。

2. 樣品過濾 樣品制備： 按藥典要求制備供試液（如溶解、稀釋樣品），若樣品含防腐劑或抑菌成分，需先 中和（如加入中和劑、滅活酶或采用薄膜沖洗法）。 過濾操作： 將集菌培養(yǎng)器安裝至集菌儀，連接樣品瓶與蠕動泵管路。 啟動蠕動泵，將供試液通過濾膜過濾（流速以不堵塞濾膜為宜，通常 5～20mL/min）。 若樣品黏稠或含顆粒，需先 預(yù)過濾（用相同孔徑濾膜或離心處理），避免濾膜堵塞。 

3. 濾膜沖洗與中和（關(guān)鍵步驟） 沖洗目的：去除樣品殘留的抑菌成分，同時避免微生物被過度沖洗損失。 沖洗液選擇： 常用 pH7.0 氯化鈉 - 蛋白胨緩沖液、無菌水 或 含 0.1% 聚山梨酯 80 的緩沖液（針對油脂類樣品）。 若樣品含抗生素，需加入 中和劑（如青霉素酶中和青霉素類藥物）。 沖洗量： 無菌檢查：每膜沖洗量 ≤1000mL（藥典通則 1101），分次沖洗，每次不宜超過 200mL。 微生物限度檢查：每膜沖洗量 100～200mL（藥典通則 1121），可分 2～3 次完成。 

4. 接種與培養(yǎng) 無菌檢查： 過濾完畢后，用無菌剪刀剪下濾膜（若為封閉式集菌器，可直接開啟培養(yǎng)端口）。 將濾膜 等分剪開，分別轉(zhuǎn)移至 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基（培養(yǎng)需氧菌 / 厭氧菌）和 胰酪大豆胨培養(yǎng)基（培養(yǎng)真菌）中。 培養(yǎng)基用量需覆蓋濾膜，培養(yǎng)溫度與時間按藥典規(guī)定（如需氧菌 30～35℃培養(yǎng) 14 天，真菌 20～25℃培養(yǎng) 14 天）。 微生物限度檢查： 過濾后，直接將濾膜貼于 營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（菌落總數(shù)）、玫瑰紅鈉培養(yǎng)基（霉菌酵母）或特定選擇性培養(yǎng)基（控制菌）表面。 倒置培養(yǎng)，溫度與時間按標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行（如菌落總數(shù) 36±1℃培養(yǎng) 48 小時）。 

5. 結(jié)果觀察與判斷 無菌檢查： 若培養(yǎng)基澄清，或雖渾濁但經(jīng)確證無菌生長，判為 符合規(guī)定；若渾濁且確證有菌生長，判為 不符合規(guī)定。 微生物限度檢查： 計(jì)數(shù)濾膜上的菌落數(shù)，換算成每單位樣品中的微生物數(shù)量，與藥典標(biāo)準(zhǔn)對比（如口服固體制劑菌落總數(shù)≤100CFU/g）。 

三、藥典關(guān)鍵技術(shù)要求 

濾膜適用性： 濾膜需通過 無菌檢查 和 孔徑驗(yàn)證（如氣泡點(diǎn)測試），確保無外源污染且截留能力符合要求。 陰性與陽性對照： 每次檢驗(yàn)需做 陰性對照（取同體積沖洗液過濾培養(yǎng)，應(yīng)無菌生長）和 陽性對照（接種已知菌驗(yàn)證培養(yǎng)基靈敏度）。 抑菌成分處理： 若樣品有抑菌性，需通過 中和試驗(yàn) 確定沖洗量或中和劑用量（藥典通則 1121 附錄 Ⅵ）。 環(huán)境控制： 操作需在 萬級背景下的局部百級潔凈區(qū) 進(jìn)行（無菌檢查），或 不低于 D 級潔凈環(huán)境（微生物限度檢查）。 四、注意事項(xiàng)（藥典隱含要求） 防止交叉污染： 每檢一個樣品需更換管路和濾器，若連續(xù)檢測同類型樣品，需用 75% 酒精消毒管路接口 后再更換。 設(shè)備清潔驗(yàn)證： 清潔后需進(jìn)行 微生物殘留驗(yàn)證（如擦拭法檢測設(shè)備表面菌落數(shù)），確保無 previous sample carryover。 記錄要求： 需記錄過濾體積、沖洗量、培養(yǎng)條件、菌落數(shù)等原始數(shù)據(jù)，符合《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》（GMP）追溯要求。 

五、藥典原文引用索引 

無菌檢查法： 《中國藥典》2025 年版 通則 1101《無菌檢查法》 通則 1121《非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計(jì)數(shù)法》 薄膜過濾法操作細(xì)節(jié)： 附錄 ⅩⅢ C《藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則》中 “薄膜過濾法” 章節(jié)。 如需更詳細(xì)操作，建議結(jié)合那艾儀器集菌儀提供的 驗(yàn)證方案（需通過藥典適用性測試）和實(shí)驗(yàn)室 SOP，確保操作符合法規(guī)要求。